曾献莹,吕素玲,杜悦,韦程媛,瞿聪,李秀桂.2016年广西壮族自治区食源性沙门菌的耐药性与耐药谱研究[J].中国食品卫生杂志,2018,30(1):22-27.DOi:10.13590/j.cjfh.2018.01.005
2016年广西壮族自治区食源性沙门菌的耐药性与耐药谱研究
(广西壮族自治区疾病预防控制中心，广西 南宁 530028)
收稿日期：2017-11-29
作者简介：曾献莹 女 技师 研究方向为食源性致病菌 E-mail:342442133@qq.com 通信作者：李秀桂 男 主任技师 研究方向为食源性致病菌 E-mail: xglgxcdc@163.com
基金项目：广西壮族自治区疾病预防控制中心青年科技工作者科研课题（桂疾控［2015］199号）
摘要:目的 了解广西壮族自治区食源性沙门菌耐药状况，建立广西壮族自治区食源性沙门菌耐药性数据库。方法 对2016年从广西壮族自治区各市县收集的分离自食品的70株沙门菌和分离自腹泻患者的234株沙门菌采用微量肉汤法对8类14种抗生素进行耐药性试验，开展耐药谱研究。结果 所有沙门菌菌株均对亚胺培南敏感，对其余13种抗生素产生不同程度的耐药。70株食品来源的沙门菌对四环素耐药率最高（45.71%，32/70）；234株腹泻患者来源的沙门菌对氨苄西林耐药率最高（70.94%，166/234），其次为四环素（70.09%，164/234）。腹泻患者来源沙门菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、四环素、萘啶酸、头孢噻肟和头孢唑啉的耐药率均高于食品分离株，差异有统计学意义（P<0.05）。2种来源的沙门菌耐药谱广泛，共同耐药谱为ACTT/S（耐氨苄西林-氯霉素-四环素-甲氧苄啶/磺胺甲噁唑）。结论 广西壮族自治区食源性沙门菌耐药状况不容乐观，特别是对青霉素类、氯霉素类、磺胺类、四环素类抗生素严重耐药，提示应对其加强监测，建立科学的防控策略。
关键词:
食源性致病菌； 沙门菌； 耐药性； 耐药谱； 最低抑菌浓度； 广西
文章编号：1004-8456(2018)01-0022-06
中图分类号：R155
文献标志码：A
Antibiotic resistance of foodborne Salmonella isolates in Guangxi in 2016
(Guangxi Center for Disease Prevention and Control, Guangxi Nanning 530028, China)
Abstract:Objective To understand the antibiotic resistance of foodborne Salmonella in Guangxi, so as to provide scientific evidence for the treatment of Salmonella infections.Methods Seventy strains of Salmonella from food and 234 from patients collected in 2016 in Guangxi were tested for susceptibility to 14 antibiotics of 8 groups by minimum inhibitory concentration（MIC）. Resistance patterns were compared and analyzed.Results The Salmonella isolates from food and patients were all sensitive to imipenem (IPM) but resistant to the other 13 antibiotics different levels. The 70 strains from food showed the highest resistance to tetracycline（TET，45.71%，32/70）. Among the 234 clinical isolates, resistance was most frequently observed in ampicillin (AMP，70.94%，166/234），followed by tetracycline (70.09%，164/234）. The resistance to ampicillin, ampicillin/sulbactam (AMS), tetracycline, nalidixic acid (NAL), cefotaxime(CTX) and cefazolin (CFZ) was statistically different between food and clinical isolates (P<0.05). The Salmonella isolates of both sources showed broad antibiotic resistance spectrum. The common pattern was resistance to ACTT/S（ampicillin-chloramphenicol-tetracycline-trimethoprim/sulfamethoxazole）.Conclusion The result indicated that the Salmonella strains isolated in Guangxi are highly resistant to a variety of drugs particularly penicillins, chloramphenicol, sulfonamides and tetracycline. This suggested the demand for enhanced monitoring and establishing scientific prevention and control strategy.
Key words:
Foodborne pathogenic bacteria; Salmonella; antibiotic resistance; resistance patterns; minimum inhibitory concentration; Guangxi
食源性疾病是全球重要的社会公共卫生问题之一，食源性致病菌抗生素耐药性的出现加剧了这一问题。一度高效的抗生素逐渐对许多重要病原体无效，导致严重的治疗危机［1］。沙门菌是我国常见的致病因子，可以通过被污染的水和食品传染给人类，从而导致食源性疾病。近年来，从食品中分离的沙门菌显示抗菌素耐药性增加，特别是动物来源的沙门菌［2］。抗菌药物在食品和动物生产中的广泛应用使沙门菌抗生素的敏感性降低，并且这种抗药性通过食品，特别是动物来源的食品可以传播给人类［1］。此外，已有报道［2-3］显示，多重耐药菌株引起人类沙门菌病发病率增加，人体健康风险面临巨大的威胁。为了更好的了解和掌握来源于食品和腹泻患者的沙门菌菌株的抗生素耐药状况及其关系，本研究对从2016年广西壮族自治区各市县收集的沙门菌食品和腹泻患者分离株，采用微量肉汤法对8类14种抗生素进行耐药分析，以了解广西壮族自治区食源性沙门菌和腹泻患者中沙门菌的耐药情况，并比较和分析这2种来源的沙门菌耐药表型的差异，用于建立广西壮族自治区食源性沙门菌耐药性数据库，为临床规范使用抗生素提供科学依据。
2种来源沙门菌主要血清型间主要耐药谱的分析结果见表5。鼠伤寒沙门菌具有较多耐药谱型，但2种来源沙门菌主要血清型之间耐药谱相似度不高，这与样品数量大小及样品来源均有关系。
多重耐药沙门菌已成为全世界人类和兽医的公共卫生问题［11］。本研究对2种不同来源沙门菌的多重耐药率比较分析，结果显示食品来源和腹泻患者来源沙门菌多重耐药率均较高，分别为31.43%（22/70）和42.31%(99/234)，腹泻患者来源沙门菌对4类抗生素耐药率（18.38%）明显高于食品来源沙门菌（5.71%），差异有统计学意义（P<0.05），但腹泻患者来源与食品来源沙门菌其他多重耐药数之间的比较，差异无统计学意义（P>0.05）。本研究结果表明食源性沙门菌对8类抗生素的多重耐药已较为严重，腹泻患者分离株的多重耐药率达到42.31%（99/234），与国内食源性沙门菌多重耐药发生率在44.68%～62.4%范围内的研究结果［5,7,12-13］基本一致，这提示监管部门和医疗机构应引起足够的重视，需要加强对沙门菌抗生素耐药性的监测，加强开展控制抗生素耐药性的措施，加强临床用药的严谨性和科学性，避免在非严重沙门菌感染中进行不必要的抗生素治疗。
对304株不同来源沙门菌耐药谱的分析，发现食品分离株得到4种优势耐药谱，腹泻患者分离株得到5种优势耐药谱，其共同的优势耐药谱为ACTT/S（耐AMP-CHL-TET-TMP/SMZ），共17株（食品分离株为4株，腹泻患者分离株为13株）。研究［14］表明，非伤寒沙门菌对ACSSuT［耐AMP-CHL-链霉素（STR）-磺胺甲噁唑/磺胺异噁唑（sulfamethoxazole/sulfisoxazole）-TET］的抗性是一个常见且重要的多重耐药性表型。本研究中，ACTT/S作为2种来源沙门菌交叉的耐药谱型，说明耐药基因具有流动性，通过食物链在食品和人类之间传播从而产生多重抗性［15-16］。值得注意的是，腹泻患者分离株中有12.82%（30/234）耐AMP-TET（AT）的沙门菌，这可能和我国早期治疗沙门菌感染频繁使用广谱类青霉素和四环素类抗生素有关。
对于从食品和腹泻患者中分离的2种来源沙门菌，其主要的血清型存在一定的差异。食品分离株检出率较腹泻患者分离株低的原因是食品样品数量及监测点多，样品分散。2016年共监测食品样品12 120份，阳性率为0.57%（70/12 120），监测病例标本5 400份，阳性率为4.33%（234/5 400），与2010—2014年广西壮族自治区食物中毒事件食源性致病菌以沙门菌为首位的报道［17］相一致，这也会造成主要血清型菌株的差异。对于相同血清型沙门菌的耐药性和耐药谱存在差异，可能是由于临床患者接受治疗后抗生素的选择压力引起的［14］，这是下一步开展耐药基因研究的基础。
本研究通过对广西壮族自治区食品和腹泻患者分离的2种不同来源沙门菌进行抗生素耐药性检测及多重耐药性分析和比较，发现不同来源沙门菌对不同的抗生素耐药性存在差异，腹泻患者分离株对青霉素类、四环素类以及氯霉素类抗生素明显高于食品分离株，提示应在临床中谨慎使用抗生素。2种来源沙门菌耐药谱范围均较广，有共同耐药谱ACTT/S，但同一血清型之间耐药谱相似度不大，提醒应严格区分人和动物用药的种类，通过控制畜牧业中抗生素的严格使用，降低通过食物链等途径将耐药基因转移到人类的风险。同时，加强监测广西壮族自治区食源性致病菌的耐药性，及时控制抗生素的滥用，为建立广西壮族自治区抗生素耐药性监测网络数据库打下基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株来源
食品和腹泻患者的沙门菌分离株均于2016年从广西壮族自治区各市县疾病预防控制中心和医院收集，由食品安全风险监测点分离上报并经广西壮族自治区疾病预防控制中心微生物检验所鉴定复核。其中食品来源样品12 120份，共检出沙门菌70株，腹泻患者来源样品5 400份，共检出沙门菌234株。腹泻患者来源沙门菌主要血清型为鼠伤寒沙门菌（100株）、肠炎沙门菌（33株）、斯坦利沙门菌（21株）、阿贡纳沙门菌（8株）、德尔卑沙门菌（5株）；食品来源沙门菌主要血清型为鼠伤寒沙门菌（10株）、肯塔基沙门菌（5株）、德尔卑沙门菌（5株）、阿贡纳沙门菌（4株）。耐药性试验质控菌株为大肠埃希菌（ATCC 25922），购自广东省食品微生物安全工程技术中心。
1.1.2主要仪器与试剂
沙门菌抗生素药敏试剂盒（美国Thermo Fisher），营养肉汤和营养琼脂均购自北京陆桥技术股份有限公司，均在有效期内使用。
1.2方法
按照药敏试剂盒使用说明，采用微量肉汤法定量测定抗生素最低抑菌浓度（MIC），包含8类14种抗生素：环丙沙星（ciprofloxacin, CIP）、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑（trimethoprim/sulfamethoxazole, TMP/SMZ）、氯霉素（chloramphenicol, CHL）、萘啶酸（nalidixic acid, NAL）、庆大霉素（gentamicin, GEN）、四环素（tetracycline, TET）、头孢噻肟（cefotaxime, CTX）、头孢西丁（cefoxitin, CFX）、氨苄西林（ampicillin, AMP）、氨苄西林/舒巴坦（ampicillin/sulbactam, AMS）、头孢他啶（ceftazidime, CAZ）、头孢唑啉（cefazolin, CFZ）、亚胺培南（imipenem, IPM）、阿奇霉素（azithromycin, ZAM）。按照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）标准［4］判读结果并确定耐药表型。
1.3统计学分析
不同来源沙门菌表型数据差异运用StataSE12统计软件进行分析，对不同来源的沙门菌耐药率进行卡方检验，以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1药敏试验结果
食品和腹泻患者来源的沙门菌对14种抗生素药敏试验及耐药率比较结果见表1。所有沙门菌均对IPM敏感，对其余13种抗生素存在不同程度的耐药。70株食品来源的沙门菌对13种抗生素的耐药率在2.86%～45.71%范围内，对CAZ耐药率最低，对TET耐药率最高。234株腹泻患者来源沙门菌对13种抗生素的耐药率在2.14%～70.94%范围内，对CFX耐药率最低，对AMP耐药率最高。食品来源与腹泻患者来源沙门菌对CTX等6种抗生素的耐药率比较差异有统计学意义（P＜0.05），对其余7种抗生素的耐药率比较差异无统计学意义（P＞0.05），结果见表1。2种来源的沙门菌主要血清型耐药性比较结果见表2。腹泻患者来源鼠伤寒沙门菌对AMP、TMP/SMZ、TET的耐药性明显高于食品来源沙门菌，差异有统计学意义（P＜0.05），腹泻患者来源阿贡纳沙门菌则对AMP、TET的耐药性高于食品来源阿贡纳沙门菌，差异有统计学意义（P＜0.05），而其余不同来源相同血清型耐药性比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
2.2不同来源沙门菌多重耐药情况的比较
分离自食品的70株沙门菌对4类抗生素耐药率达到5.71%（4/70），分离自腹泻患者的234株沙门菌对4类抗生素耐药率达到18.38%（43/234），两者差异有统计学意义（P＜0.05）。2种来源沙门菌其余多重耐药数比较差异无统计学意义（P＞0.05），结果见表3。
2.3不同来源沙门菌耐药谱的比较分析
对70株食品来源沙门菌和234株腹泻患者来源沙门菌分别进行主要耐药谱（两者耐药菌株≥3株）的分析，结果见表4。食品来源沙门菌优势耐药谱（耐药菌株≥4株）分别是CHL、TET、TMP/SMZ-CHL-TET、AMP-CHL-TET-TMP/SMZ，均占全部食品来源菌株的5.71%（4/70）。腹泻患者来源沙门菌优势耐药谱（耐药菌株≥10株）为AMP-TET、AMP-CHL-TET-TMP/SMZ、TMP/SMZ-CHL-TET-AMP-AMS、 NAL和TET，所占比例分别为12.82%（30/234）、5.56%（13/234）、4.70%（11/234）、4.70%（11/234）和4.27%（10/234）。2种来源沙门菌有11种共同耐药谱，分别是：CHL、TET、CHL-TET、NAL-TET、AMP-TET、TMP/SMZ-TET、TET-AMP-AMS、TMP/SMZ-CHL-TET、NAL-AMP-AMS-CFZ、TET-AMP-AMS-CFZ、AMP-CHL-TET-TMP/SMZ；其中AMP-CHL-TET-TMP/SMZ是2种来源共同优势耐药谱，共17株。
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表1食品来源和腹泻患者来源沙门菌耐药试验结果 Table 1Antimicrobial resistance of Salmonella isolates from food and diarrhea patients |
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表2食品来源和腹泻患者来源沙门菌主要血清型耐药试验结果 Table 2Antimicrobial resistance of major serotype of Salmonella isolates from food and diarrhea patients |
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表3食品和腹泻患者来源沙门菌多重耐药率的比较 Tabel 3Comparison of multiple drug resistance of Salmonella isolates from food and diarrhea patients |
3讨论
本研究选取了2016年从广西壮族自治区各市县疾病预防控制中心采集的食品沙门菌分离株和腹泻患者沙门菌分离株，采取微量肉汤法进行8类14种抗生素的耐药试验。研究结果显示，2种不同来源的沙门菌除对IPM敏感，均对其余13种抗生素有不同程度的耐药，其中70株食品来源沙门菌结果［9］显示，我国沙门菌属对AMP的耐药率呈上升趋势，CHL耐药率也有小幅度的上升。而美国疾病预防控制中心国家抗生素耐药性监测系统（NARMS）提供的数据［10］显示，20世纪90年代开始，美国患者来源沙门菌对各类抗生素耐药率呈下降的趋势，这可能与美国对抗生素采取严格监管有关。本研究结果显示，不同种类 抗生素的耐药率存在不同程度的差异。β-内酰胺类 中青霉素类抗生素AMP、四环素类抗生素以及氯霉素类抗生素较其他种类抗生素耐药率高，对临床用药具有一定启示作用。
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表4食品来源和腹泻患者来源沙门菌主要耐药谱的比较 Table 4Comparison of multiple drug resistance of Salmonella isolates from food and diarrhea patients |
对304株不同来源沙门菌耐药谱的分析，发现食品分离株得到4种优势耐药谱，腹泻患者分离株得到5种优势耐药谱，其共同的优势耐药谱为ACTT/S（耐AMP-CHL-TET-TMP/SMZ），共17株（食品分离株为4株，腹泻患者分离株为13株）。研究［14］表明，非伤寒沙门菌对ACSSuT［耐AMP-CHL-链霉素（STR）-磺胺甲噁唑/磺胺异噁唑（sulfamethoxazole/sulfisoxazole）-TET］的抗性是一个常见且重要的多重耐药性表型。本研究中，ACTT/S作为2种来源沙门菌交叉的耐药谱型，说明耐药基因具有流动性，通过食物链在食品和人类之间传播从而产生多重抗性［15-16］。值得注意的是，腹泻患者分离株中有12.82%（30/234）耐AMP-TET（AT）的沙门菌，这可能和我国早期治疗沙门菌感染频繁使用广谱类青霉素和四环素类抗生素有关。
对于从食品和腹泻患者中分离的2种来源沙门菌，其主要的血清型存在一定的差异。食品分离株检出率较腹泻患者分离株低的原因是食品样品数量及监测点多，样品分散。2016年共监测食品样品12 120份，阳性率为0.57%（70/12 120），监测病例标本5 400份，阳性率为4.33%（234/5 400），与2010—2014年广西壮族自治区食物中毒事件食源性致病菌以沙门菌为首位的报道［17］相一致，这也会造成主要血清型菌株的差异。对于相同血清型沙门菌的耐药性和耐药谱存在差异，可能是由于临床患者接受治疗后抗生素的选择压力引起的［14］，这是下一步开展耐药基因研究的基础。
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表5食品来源和腹泻患者来源沙门菌主要血清型耐药谱的比较 Table 5Comparison of drug resistance pattern of major serotype Salmonella isolates from food and diarrhea patients |
参考文献
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