食源性致病菌DNA快速释放提取试剂的研制
作者:
作者单位:

湖北省食品质量安全监督检验研究院 国家市场监管重点实验室 动物源性食品中重点化学危害物 检测技术,湖北省食品质量安全检测工程技术研究中心,湖北 武汉 430075

作者简介:

刘艳 女 高级工程师 研究方向为食品微生物检测 E-mail:297331182@qq.com

通讯作者:

彭青枝 女 高级工程师 研究方向为食品质量安全检测与管理 E-mail:1415720863@qq.com

中图分类号:

R155

基金项目:

湖北省重点研发计划项目(2020BCA091)


Development of rapid extraction reagent for DNA release of foodborne pathogenic bacteria
Author:
Affiliation:

Hubei Provincial Engineering and Technology Research Center for Food Quality and Safety Test, Key Laboratory of Detection Technology of Focus Chemical Hazards in Animal-derived Food for State Market Regulation, Hubei Provincial Institute for Food Supervision and Test, Hubei Wuhan 430075, China

Fund Project:

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    摘要:

    目的 研制一种食源性致病菌DNA快速释放提取试剂并优化其使用方法。方法 采用正交试验法,以qPCR扩增Ct值为指标,考察曲拉通X-100(Triton X-100,A)、十二烷基硫酸钠(SDS, B)、乙二胺四乙酸(EDTA, C)和乙基苯基聚乙二醇(NP-40, D)四因素对释放效果的影响,并用实际样品加标后检测判定样品基质对释放效果的影响,对适用过程进行进一步优化。结果 最优试剂组合为A1B2C2D2,即Triton X-100的浓度为5.5%、SDS为0.04%,EDTA为2 mmol/L,NP-40为2%时,提取效果最好。结论 该试剂温度适应范围广,能够在一般条件下进行样品处理和核酸提取,耗时短,效率高,使用便捷且生产成本低,具有一定的现场快检应用价值。

    Abstract:

    Objective To develop a fast DNA release extraction reagent for foodborne pathogenic bacteria and optimize its application.Methods Orthogonal test was used to investigate the influence of Triton X-100(A), SDS(B), EDTA(C) and NP-40 (D)on the release effect. The influence of sample matrix on the release effect was determined by testing the actual sample with spiking standard, and the applicable process was further optimized.Results The optimal reagent combination was A1B2C2D2, which were Triton X-100 5.5%, SDS 0.04%, EDTA 2 mmol/L and NP-40 2%.Conclusion The reagent has a wide range of temperature adaptation with short time and high efficiency, which can be used for sample processing and nucleic acid extraction in poor experimental environment. It is convenient to use with low production cost and has application value for on-site quick inspection.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

刘艳,王鸣秋,李诗瑶,朱必婷,黄茜,彭青枝.食源性致病菌DNA快速释放提取试剂的研制[J].中国食品卫生杂志,2023,35(1):49-54.

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  • 收稿日期:2021-12-29
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  • 在线发布日期: 2023-03-07
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