利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数
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TS941.12 S511

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上海市科技兴农重点攻关项目 (农科攻字 (2 0 0 2 )第 3 -4 3号 ),上海市科学技术委员会科研计划项目 (0 3ZD0 5 0 3 2 )。~~


Estimating copy number of transgenes in transformed rice by real-time quantitative PCR
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    为分析转基因水稻外源基因拷贝数,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因(GUS和HPT基因)和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了14株T0代的转基因水稻植株,得到了外源基因插入分别为1、2、3和4的转基因植株,同时利用Southern Blot方法进行验证分析。随机选择18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株,用Southern Blot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数,Southern Blot分析结果显示有15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于Southern Blot的分析结果,主要原因是Southern Blot方法在同一个插入位点有多拷贝的T-DNA片段插入时,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段,电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。

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引用本文

杨立桃 赵志辉 丁嘉羽 张承妹 贾军伟 张大兵.利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数[J].中国食品卫生杂志,2005,(2).

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