谭莹,倪竹南,胡争艳,张晶,王志园,汤鋆.高效液相色谱法测定保健食品中红景天苷[J].中国食品卫生杂志,2017,29(2):164-167.DOi:10.13590/j.cjfh.2017.02.010
高效液相色谱法测定保健食品中红景天苷
（浙江省疾病预防控制中心，浙江 杭州310051）
作者简介： 谭莹主管技师研究方向为食品、保健食品分析检测 E-mail：465859939@qq.com
收稿日期： 2016-12-16
基金项目： 浙江省医药卫生科技计划平台骨干项目（2013RCA009）
摘要:目的 改进保健食品中红景天苷的高效液相色谱（HPLC）测定方法。方法用不同溶剂稀释对照品及提取样品，以HPLC法测定红景天苷含量，选择最佳溶剂，优化色谱条件，并作方法学论证。结果以50%甲醇作为对照品的稀释溶液和样品的提取溶剂，红景天苷在1.305～130.5 μg/ml的线性范围内线性良好，回归方程y=7.377395×10-5x+0.1873961（r=0.999 9），最低检出浓度为0.015 mg/g；平均回收率为92.1%～98.4%，RSD为1.98%～3.26%。结论本方法操作简便、定量准确可靠。
关键词:
红景天苷； 保健食品； 高效液相色谱； 功效成分； 测定； 方法
文章编号：1004-8456(2017)02-0164-04 中图分类号： R155 文献标识码：A
Determination of salidroside in health food by high performance liquid chromatography
（Zhejiang Center for Disease Control and Prevention，Zhejiang Hangzhou 310051，China）
2016-12-16
Abstract:Objective To improve the high performance liquid chromatography method for quantitation of salidroside in health food.MethodsThe solvent and chromatography condition were optimized according to the determination of standard and extracted samples. ResultsSalidroside content exhibited a linear relation within 1.305-130.5 μg/ml using 50% methanol as solvent. The regression equation was y=7.377395×10-5x+0.1873961 (r=0.999 9) and the detection limit was 0.015 mg/g. Furthermore, the average recoveries were 92.1%-98.4%, and the RSD was 1.98%-3.26%. ConclusionThis method was simple, accurate and reliable for determination of salidroside in health food.
Key words:
Salidroside； health food； high performance liquid chromatography； efficacy components； detection； method
红景天为景天科植物，是被康熙帝御封为“仙赐草”的“高原人参”，其主要功效成分为红景天苷（salidroside）。红景天苷能保护心脑血管，调节神经、内分泌系统、免疫系统，具有抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射等功效［1-7］。
市场上以红景天作为主要原料的保健食品琳琅满目，测定红景天苷含量是对这些保健食品质量控制的主要方法。测定保健食品中红景天苷的方法有气相色谱法和薄层色谱法等，其中最常用的方法是高效液相色谱法（HPLC）［8-12］。本试验参考中华人民共和国卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》［12］，采用高效液相色谱法测定保健食品中红景天苷的含量，结果显示峰形欠佳，从而影响红景天苷含量的测定。本课题组对此方法进行改进，优化提取溶剂及色谱条件，取得了理想的效果。
分别以甲醇、50%甲醇和9%甲醇3种提取溶剂按1.2.1处理同一批号且充分混匀的样品，使用该方法中的流动相即甲醇-0.02 mol/L乙酸钠溶液（9∶91，V/V）［12］，HPLC进样检测，得到的结果见图2。其中，甲醇作为提取液测定红景天苷，其峰形变形，给定量带来不便；以50%甲醇和9%甲醇作为提取液，则不会出现上述问题。另外，本试验比较了3种溶剂在超声提取15、30 min后的提取效率，结果如表2所示；用50%甲醇提取30 min后，提取效率为100%；因此，兼顾提取效率和峰形选择50%甲醇作为对照品储备液的稀释溶液和样品的提取溶剂，并确定超声提取时间为30 min。注：a为甲醇； b为50%甲醇； c为9%甲醇。
市场上以红景天作为主要原料的保健食品琳琅满目，测定红景天苷含量是对这些保健食品质量控制的主要方法。测定保健食品中红景天苷的方法有气相色谱法和薄层色谱法等，其中最常用的方法是高效液相色谱法（HPLC）［8-12］。本试验参考中华人民共和国卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》［12］，采用高效液相色谱法测定保健食品中红景天苷的含量，结果显示峰形欠佳，从而影响红景天苷含量的测定。本课题组对此方法进行改进，优化提取溶剂及色谱条件，取得了理想的效果。
1材料与方法
1.1主要仪器与试剂
岛津LC-20AD高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器及数据处理器，日本岛津）、数控超声波清洗器、离心机、Milli-Q超纯水制备系统。红景天苷对照品（110818-201206，纯度≥99%，中国药品生物制品检定所）、甲醇（色谱纯），含红景天苷的保健食品由市场购买。
1.2方法
1.2.1样品处理
取混合均匀的样品适量，称取0.4 g（精确至0.000 1 g）于50 ml离心管中，加入约30 ml 50%甲醇，超声提取30 min；8 000 r/min离心5 min，将上清液转移至50 ml容量瓶中，向残渣中加入10 ml 50%甲醇，重复提取1次，合并2次提取液；用50%甲醇准确定容。摇匀后经0.22 μm滤膜过滤，HPLC待测。
1.2.2标准工作溶液的配制
精密称取红景天苷对照品13.05 mg于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，准确定容，制得1.305 mg/ml的 标准储备液。准确吸取储备液2.50 ml于25 ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，制得中间液。分别准 确吸取中间液0.10、0.50、1.00、2.50、5.00、10.00 ml 于10 ml容量瓶中，制成标准工作溶液。
1.2.3仪器条件
色谱柱为Phenomenex-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相A为水，流动相B为甲醇，流速1.0 ml/min，梯度洗脱，具体梯度洗脱程序见表1。柱温35 ℃；二极管阵列检测器检测，检测波长222 nm；进样量10 μl；比较样品与标准组分的保留时间及吸收光谱特性进行定性，外标法定量。
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表1梯度洗脱程序 Table 1Gradient elution program |
2结果与分析
2.1对照品储备液的稀释溶液和提取溶剂的优化
采用《保健食品检验与评价技术规范》的方法，用甲醇配制红景天苷对照品制成储备溶液，并用甲醇稀释配制成工作溶液，使用该方法中的流动相：甲醇-0.02 mol/L乙酸钠溶液（9∶91，V/V），经HPLC检测，其色谱峰变形；本试验分别用50%甲醇和9%甲醇稀释其储备液，得到的色谱峰峰形对称尖锐，见图1。可能是因为流动相中的甲醇比例只有9%，而进样溶液是甲醇，进样的样品溶剂与流动相的极性相差大，流动相还来不及将其稀释达到平衡造成的，因此，可以选择50%甲醇和9%甲醇作为对照品储备液的稀释溶液，减少两者之间的极性差异，以解决峰形变异的问题。注：a为甲醇稀释； b为50%甲醇稀释； c为9%甲醇稀释。
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图1红景天苷对照品的液相色谱图 Figure 1Chromatograms of salidroside standards |
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图2不同溶剂提取同一保健食品的色谱图 Figure 2Chromatograms of the same sample with the different extract solvent |
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表2 3种溶剂的提取效率比较（%） Table 2Comparison of extraction efficiency of three kinds of solvents |
2.2检测波长的选择
用二极管阵列检测器，对红景天苷在190～400 nm范围内进行扫描（图3），在222 nm处得到最大吸收，因此设定222 nm作为检测波长。
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图3红景天苷对照品的扫描光谱图（扫描范围190～400 nm） Figure 3Spectral scanning of salidroside standards |
2.3流动相的选择
考察了甲醇-0.02 mol/L乙酸钠溶液（9∶91，V/V）［12］和甲醇-水（9∶91，V/V）两个流动相系统，结果在流动相为甲醇-水（9∶91，V/V）时，红景天苷与其他组分均能达到基线分离。考虑盐溶液作为流动相，在平衡色谱柱和冲洗色谱柱上比较费时，且容易堵塞，因此采用甲醇-水（9∶91，V/V）作为流动相。在此基础上，采用1.2.3梯度洗脱方法优化甲醇和水的配比，以便应用于更复杂的样品基质，优化后的样品谱图见图4。
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图4优化试验条件后的样品谱图 Figure 4Chromatograms of the sample under optimum conditions |
2.4方法学验证
2.4.1线性关系及检测限
以红景天苷浓度x为横坐标，峰面积y为纵坐标，按1.2.2绘制的标准曲线，其线性回归方程为：y=7.377395×10-5+0.1873961（r=0.999 9）。结果表明：红景天苷在1.305～130.5 μg/ml范围内浓度与峰面积具有良好的线性关系。根据色谱响应值S/N≥3标准计算，红景天苷最低检出浓度为0.015 mg/g。
2.4.2准确度和精密度
根据建立的方法，分别取6份0.4 g（精确至0.000 1 g）该样品，进行三个水平的加标回收率试验，结果见表3。由其可知，红景天苷添加水平为0.326、3.26、6.53 mg/g时，平均回收率为92.1%～98.4%，RSD为1.98%～3.26%；均符合保健食品检测需求。
3小结
根据卫生部2003年版《保健食品检验与评价
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表3方法的回收率试验（n=6） Table 3Recoveries of salidroside |
参考文献
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