克罗诺杆菌，早期也称阪崎肠杆菌，是一类周生鞭毛、能运动、无芽胞的革兰阴性杆菌。克罗诺杆菌属于条件致病菌，对于新生儿，尤其是早产儿或免疫力较弱婴儿的感染风险最高，可引起严重脑膜炎、败血症、坏死性结肠炎等疾病，死亡率可高达40%～80%^［1］。自1958年英国首次报道由克罗诺杆菌引起的病例后，世界各国均有该菌引起的严重感染事件暴发。我国由克罗诺杆菌引起的感染事件也多有发生，例如2013年温州市256例婴幼儿感染腹泻病例中有3例由克罗诺杆菌引起^［2］，2014年本实验室对1例4月大婴儿反复腹泻病例进行病原学检测及溯源分析，最终确定由克罗诺杆菌污染环境导致感染^［3］。目前对于克罗诺杆菌的临床治疗并没有明确用药方案，而由于抗生素滥用等原因，导致该菌耐药情况日益严重，一旦造成院内感染，将严重威胁婴幼儿的生命健康。2002年DENNISON等^［4］已经发现克罗诺杆菌对氨苄西林、庆大霉素和头孢噻肟具有多重耐药性。为了解四川省克罗诺杆菌耐药情况及变化趋势，本研究选用6类8种抗生素药物，对四川省2010—2014年及2016年婴幼儿奶粉、婴幼儿谷物辅助食品等及临床病例中分离的109株克罗诺杆菌开展药物敏感性检验，为临床治疗提供依据。
        2010—2014年及2016年四川省市售婴幼儿配方奶粉、婴幼儿谷物辅助食品、临床4月龄腹泻幼儿患者粪便标本及其生活环境涂抹样品分离的109株克罗诺杆菌，见表1。所有菌株均经过VITEK 2 Compact全自动微生物生化鉴定仪鉴定。
大肠埃希菌（ATCC 25922）由本实验室保存，其最小抑菌浓度（MIC）值均在美国临床实验室标准委员会（CLSI）2016年版标准^［5］范围内。2015年未开展婴幼儿食品中克罗诺杆菌监测，因此无该年分离菌株。
        Nephelometer比浊仪、加样器、96孔药敏板、CAMHBT肉汤均购自美国赛默飞。
        将低温保存的试验菌株用营养肉汤复苏后，划线接种至血琼脂平皿，放于37 ℃恒温培养箱培养24 h。从新鲜培养的血琼脂平皿中挑取3～5个菌落，在去离子水中乳化，并使用比浊仪调节到0.5麦氏浊度。取配制好的菌悬液50 μl加入到11 ml CAMHBT肉汤中，得到试验用菌悬液。用加样仪分别在96孔药敏板中每孔加入100 μl菌悬液，用粘性封膜密封所有孔，放置37 ℃恒温培养箱过夜培养后读取试验结果。
        记录每一种抗生素抑制细菌生长的MIC值。参照CLSI 2016年版标准^［5］进行判读，结果为敏感、中介、耐药，见表2。
        109株克罗诺杆菌对环丙沙星、萘啶酸、头孢噻肟、庆大霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、氯霉素等7种
        不同来源食品样品分离菌株对头孢西丁均表现出耐受性，无明显差异。同一患者粪便标本分离菌株与其家中环境分离菌株中有2株对头孢西丁耐药。不同来源菌株对头孢西丁的敏感性见表4。         抗生素生产过程中废弃物不经处理直接排放到环境中，以及抗生素在农业养殖及医疗卫生等多个领域的不合理使用，导致细菌耐药情况日益严重。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株及耐碳青霉烯细菌等各类超级耐药菌严重威胁着人类生命健康。世界卫生组织提出，到2050年全球因抗生素耐药引起的死亡人数或将达1 000万^［6］，因此加强耐药监测，了解细菌耐药变化趋势具有必要性和紧迫性。克罗诺杆菌作为一种条件致病菌，其感染对象主要为新生儿，特别是早产儿等免疫能力低下的婴儿，可导致其感染脑膜炎等重症，严重威胁婴儿生命健康，应引起高度重视，并对其进行疾病监测和耐药监测。国内研究^［7-9］发现克罗诺杆菌对苯唑西林和一代头孢类药物头孢噻吩100%高度耐药，崔晶花等^［10］对分离自国内11个省（直辖市）婴幼儿奶粉及米粉中的60株克罗诺杆菌进行药敏分析后，发现4株对14种抗生素均耐药的多重耐药菌株。而本研究仅在四川省采集样品，且品牌相对集中，因此未发现多重耐药菌株。本试验分离的109株克罗诺杆菌对 环丙沙星、萘啶酸、头孢噻肟、庆大霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、氯霉素、四环素等7种抗生素均敏感，而53株细菌对头孢西丁耐药，耐药率高达48.6%。头孢西丁为头孢类抗生素，类似于第二代头孢菌素，对革兰阴性菌有较强的抗菌作用，具有高度抗β-内酰胺酶性质，其通过与青霉素结合蛋白（PBPs）结合，抑制细胞壁合成，从而起到抗菌作用。进一步研究需要确定，克罗诺杆菌对头孢西丁的高度耐药是否由改变青霉素的结合蛋白位点而引起。克罗诺杆菌广泛分布于自然界环境和食品中，有研究^［11］表明其感染婴儿的主要途径为食用被细菌污染的奶粉和米粉。本试验分离自患者粪便标本和环境涂抹样品中的3株克罗诺杆菌，其中2株对头孢西丁耐药，与食品中分离菌株的耐药性较一致，提示食源性菌株的耐药检测结果对临床用药具有一定指导作用。目前，克罗诺杆菌对多数临床药物较敏感，多重耐药菌株检出较少，但本研究发现试验菌株对甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和氯霉素的耐受性呈逐年上升趋势，提示应加强菌株耐药监测，在临床治疗中合理用药，减少多重耐药菌株的产生。