R15 S855.11
国家自然科学基金科学基金 , 国家高技术研究发展计划(863计划) ,
目的构建2型猪链球菌突变株05ZY△0913,05Zy△0936。方法以05ZY为模版,分别扩增0913、0936基因内部504bp,549bp片段为同源臂,与pSET4S质粒进行连接,将连接产物转入DH5a感受态细胞中,构建载体0913-pSET4S,0936-psET4S。然后利用插入失活法,将构建的0913-pSET4S、0936-pSET4S载体通过电转化导入2型猪链球菌的感受态细胞中,利用壮观霉素抗性筛选得到阳性转化子,并用PCR进行鉴定。结果筛选到的菌株均能抵抗100μg/ml壮观霉素,经PCR鉴定,为失活了目的片段(0913和0936片段)的2型猪链球菌突变株。结论本研究成功构建了2个突变株,为进一步研究目的片段的基因功能奠定了基础。
路玲玲,李蓉,李文君,袁媛,郑玉玲,王恒樑,姜永强.插入失活法构建2型猪链球菌突变株[J].中国食品卫生杂志,2008,(2).