为检测婴幼儿配方奶粉中胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸5种核苷酸的含量，建立了奶粉中5种核苷酸的紫外检测器液相色谱法。对试样提取、固相萃取等前处理方式和仪器检测条件进行了研究，试样经0．5％乙酸去除蛋白质，氨基固相萃取柱富集和净化，symmetry C18柱分离，254nm紫外检测器液相色谱分析方法定量检测。胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸和次黄嘌呤核苷酸的添加回收率分别是90．0％～94．2％、86．4％～93．2％、85．7％～92．6％、90．0％和85．7％～93．3％，相对标准差分别为6．6％、3．4％、8．2％、6．8％和8．2％，检出限分别为0．04、0．05、0．05、0．06和0．04μg/mL。3年来对30件送检样品的检测显示，检测结果与标示量基本一致。该方法适用于婴幼儿配方奶粉核苷酸含量的分析。