建立了食品中雌三醇、雌二醇、雌酮、睾酮、孕酮５种激素同时分离测定的高效液相色谱分析方法。各类食品样品经固一液、液一液萃取处理后，以甲醇一乙腈—四氢呋喃—０．０１ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠溶液为流动相，安眠酮为内标进行反相液相色谱分析。５种激素分离效果良好，各组分浓度１．０～３２μｇ／ｍＬ标准曲线线性关系好，回归分析的相关系数均大于０．９９９。方法的最低检测浓度：雌三醇０．００９ｍｇ／ｋｇ；雌二醇０．０３８ｍｇ／ｋｇ；雌酮０．０４４ｍｇ／ｋｇ；睾酮０．０２０ｍｇ／ｋｇ；孕酮０．０７１ｍｇ／ｋｇ。５种激素同时分离测定的相对标准偏差小于１５％不同浓度５种激素同时回收的回收率均在８０％以上。该方法操作简便、准确、灵敏，满足实际样品测定需要。应用该方法对市场上的部分食品分析的结果表明，一些营养保健食品中会有不同成分的激素，提示有关部门应尽快制定法规进行监督管理。